De Colegiata de Nuestra Señora de la Asunción is zonder twijfel de belangrijkste bezienswaardigheid van Osuna. Dit indrukwekkende renaissancecomplex uit de 16e eeuw omvat meerdere kerkelijke ruimtes, een hoogstaand barok interieur en het pantheon van de hertogen van Osuna. De kunstcollectie behoort tot de beste van Andalusië en bevat werken van onder anderen José de Ribera en Juan de Mesa, aangevuld met waardevolle Vlaamse schilderijen. De bouw startte in 1531 in opdracht van Juan Téllez Girón, hertog van Osuna. Rondleidingen vinden op vaste tijden plaats; entree circa 5 euro.
Direct naast de Colegiata ligt de historische universiteit van Osuna. De bouw begon in 1548 en kreeg pas in de 19e eeuw haar definitieve vorm. Tijdens een rondleiding bezoek je de patio, de voormalige collegezaal en een kleine kapel. De universiteit is nog steeds in gebruik en is tegenwoordig verbonden aan de Universiteit van Sevilla.
Het archeologisch museum bevindt zich in de Torre del Agua, een verdedigingswerk dat oorspronkelijk door de Almohaden in de 12e eeuw werd gebouwd en later werd aangepast door de ridders van Calatrava. De collectie bestrijkt meerdere perioden, waaronder de Iberische tijd, de Bronstijd en de Romeinse periode, met zowel originele stukken als replica's.
Ook de lagergelegen delen van Osuna herbergen meerdere interessante kerken. De Iglesia de la Merced en het Iglesia-Convento de Nuestra Señora del Carmen springen eruit. Vooral de laatste is bekend om haar fraai bewaarde renaissancekapel.
Calle San Pedro wordt regelmatig genoemd als een van de mooiste straten van Andalusië. Of die titel terecht is, valt te betwisten, maar de straat is zonder meer sfeervol, met statige herenhuizen en uitzicht op de stierenarena. Een korte wandeling hier is absoluut de moeite waard.
De Plaza de Toros de Osuna werd wereldwijd bekend door haar rol in Game of Thrones. In het weekend en op feestdagen is de arena te bezoeken onder begeleiding, meestal voor een kleine vergoeding (ongeveer 2,50 euro). Informatie over actuele openingstijden is verkrijgbaar bij het toerismebureau.
Dit 16e-eeuwse klooster herbergt een sobere maar elegante kerk en een rustige kloostertuin. Het complex geeft een goed beeld van het religieuze leven in Osuna tijdens de renaissanceperiode.
Voor een goed overzicht van Osuna en het omliggende Andalusische landschap is dit uitzichtpunt ideaal. Vooral bij zonsondergang levert dit fraaie panorama's op over de boven- en benedenstad.
Osuna was in de Romeinse tijd bekend als Urso. Verspreid door de stad zijn nog restanten te vinden van deze periode, waaronder inscripties en fundamenten die verwijzen naar het Romeinse verleden van de stad.
Osuna leent zich uitstekend voor een korte culinaire ontdekkingstocht. Typische gerechten zijn onder meer salmorejo, stoofgerechten met wild en lokale zoetigheden. Verschillende tapasbars en traditionele restaurants liggen op loopafstand van elkaar in het historische centrum.